科林斯会议后，腓力还没来得及东侵亚洲，第二年就被刺死。其子亚历山大继位（公元前336－323年），即亚历山大三世。他曾师从亚里斯多德，深受希腊文化熏陶，颇具才能又野心勃勃。腓力死后，马其顿内部、北方部落、南方底比斯人先后骚动、起义，亚历山大全部予以残酷镇压。从公元前334年开始亚历山大率军东侵，首先占领小亚，接着向叙利亚推进，波斯皇帝大流士三世亲率大军抵抗。公元前333年秋，两军会战伊苏斯，波斯溃败，大流士三世的家属全部被俘，大流士三世要求议和，但亚历山大拒绝和波斯议和，南进腓尼基，公元前332年将其攻灭，接着进军埃及，在亚历山大表示保护和支持神庙祭司后，埃及祭司便宣布亚历山大为太阳神之子，古代法老的继承人，亚历山大轻而易举占领了埃及。公元前331年春，亚历山大从埃及出发，进军两河流域，在高加美拉再与波斯决战，亚历山大大胜。大流士三世仓皇东逃，后被杀。亚历山大进入波斯本土后，洗劫了波斯几个古都的王宫和金库，取代了波斯帝国的统治。亚历山大入侵中亚时遇到当地部落的顽强抵抗，公元前330－328年间都在中亚。这期间马其顿、希腊人中有人反对继续东进，受到镇压。亚历山大同时采取拉拢波斯和中亚贵族的政策，他自己娶一中亚贵族之女为妻。公元前327年，亚历山大从巴克特里亚向南亚次大陆进发，侵入印度河上游地区。他在此受到顽强抵抗，同时他的部下也疲惫不堪，无法再前进了，于是被迫退兵。公元前326年，马其顿军兵分两路，于次年退回巴比伦城，该城成为亚历山大的都城。亚历山大之所以能征服波斯帝国，最重要的原因就是波斯帝国内部的阶级矛盾和民族矛盾已十分尖锐，统治阶级内部也很腐朽，因此亚历山大只经过两次较大战役就灭亡了波斯。亚历山大帝国在短期中的征服中迅速建立起来，但是它同波斯帝国一样不巩固，因为他在继承波斯帝国的同时，也就继承了波斯帝国中的全部矛盾，而且加上了马其顿、希腊人与东方各族人民的矛盾，因此亚历山大帝国很快走向分裂。
